December 4, 2020
lembcke

MMAC1, dephosphorylerer lipid anden messenger, phosphatidylinositol

Tumorundertrykkeren, PTEN / MMAC1, dephosphorylerer lipid anden messenger, phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphat.

Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphat (PtdIns (3,4,5) P3) er et nøglemolekyle, der er berørt af signaludvikling af celler. Vi demonstrerede, at overekspression af PTEN, en formodet tumorundertrykker, reducerede insulininduceret PtdIns (3,4,5) P3-fremstilling i humane 293-celler uden at påvirke insulininduceret phosphoinositid 3-kinase-aktivering. Yderligere, transfektion af den katalytisk inaktive mutant af PTEN (C124S) anbragt på PtdIns (3,4,5) P3-ophobning uden fravær af insulinstimulering.

Oprenset rekombinant PTEN-katalyseret dephosphorylering af PtdIns (3,4,5) P3, især på sted tre på inositolringen. PTEN udviste desuden 3-phosphatase-øvelse mod inositol 1,3,4,5-tetrakisphosphat. Vores resultater øger sandsynligheden for, at PTEN virker in vivo som en phosphoinositid-3-phosphatase ved at regulere PtdIns (3,4,5) P3-intervaller. Som forventet var C124S-mutanten af ​​PTEN ude af stand til at katalysere dephosphorylering af PtdIns (3,4,5) P3 i tråd med den mekanisme, der blev bemærket i protein-tyrosinphosphatase-katalyserede reaktioner.

 

CC CKR5: en RANTES-, MIP-1alpha-, MIP-1beta-receptor som en fusionskofaktor til makrofag-tropisk HIV-1 ????
Human immundefektvirus type 1 (HIV-1) -indgang kræver fusionskofaktorer på CD4 + målcellen. Fusin, en heterotrimerisk GTP-bindende protein (G-protein) -koblet receptor, fungerer som en cofaktor for T-cellelinie-tropiske isolater.
Kemokinerne RANTES, MIP-1alpha og MIP-1beta, som undertrykker en infektion af makrofag-tropiske isolater, inhiberede selektiv cellefusion medieret af de tilsvarende kappeglycoproteiner (Envs). Rekombinant CC CKR5, en G-proteinkoblet receptor til disse kemokiner, gengivede CD4-udtrykkende ikke-humane celler fusionskompetente fortrinsvis med makrofag-tropiske Envs.

CC CKR5 messenger RNA blev påvist selektivt i cellesorter, der var sårbare over for makrofag-tropiske isolater. CC CKR5 er således en fusionskofaktor for makrofag-tropiske HIV-1-stammer.

 

lembcke
lembcke

Segregering af en missense-mutation inden for amyloidprecursorproteingenet med familiær Alzheimers sygdom

 

Et locus, der adskiller sig med familiær Alzheimers sygdom (AD), er blevet kortlagt til kromosom 21 nær det amyloide precursorprotein (APP) -gen. Rekombinanter mellem APP-genet og AD-locus er blevet rapporteret, som syntes at udelukke det som positioneringen af ​​mutationen, der påførte familiær AD. Den seneste genetiske evaluering af mange AD-husstande har imidlertid vist, at sygdommen er heterogen. Husstande med AD, der begynder sent, præsenterer ikke forbindelse til kromosom 21-markører.

Nogle husstande med tidlig begyndende AD præsenterer forbindelse til kromosom 21-markører, men nogle gør det ikke. Dette har ført til antydningen om, at der er ikke-allel genetisk heterogenitet, selv inden i den tidlige debut af familiær AD. For at holde os væk fra de problemer, som heterogenitet udgør for genetisk evaluering, har vi nu undersøgt cosegregation af AD og markører sammen med den lange arm af kromosom 21 i en enkelt husstand med AD bekræftet ved post mortem.

Lige her viser vi, at der på denne slægt, der udviser kobling til kromosom 21-markører, er en niveaumutation inden for APP-genet. Denne mutation forårsager en aminosyresubstitution (Val —- Ile) nær carboxyterminalen af ​​beta-amyloidpeptidet. Screening af forskellige forekomster af familiær AD afslørede en anden ikke-relateret husstand, gennem hvilken denne variant sker. Dette betyder, at nogle forekomster af AD meget godt kan tilskrives mutationer i APP-genet.

 

In vitro insertionsmutagenese med et selekterbart DNA-fragment

En helt ny teknik til in vitro insertionsmutagenese af gener klonet i Escherichia coli tilbydes. Denne nemme proces kombinerer nogle store fordele ved in vitro DNA linker mutagenese med disse af in vivo transposition mutagenese. Det gør brug af omega-fragmentet, en 2,0 kb DNA-sektion bestående af et antibiotikaresistensgen (Smr / Spcr-genet fra R100.1-plasmidet) flankeret af korte inverterede gentagelser, der bærer transkriptions- og translationstermineringsindikatorer og kunstige polylinkere.

Omega-fragmentet indsættes lige ind i et lineariseret plasmid ved in vitro-ligering, og de rekombinante DNA-molekyler vælges ved deres resistens over for streptomycin og spectinomycin. Omega-fragmentet afslutter RNA- og proteinsyntese for tidligt og muliggør således definition og kortlægning af hver transkriptions- og translationmodel.

På grund af den symmetriske konstruktion af omega opnås den samme virkning med indsættelser i begge retninger. Antibiotikaresistensgenet kan efterfølgende udskæres fra de muterede molekyler, idet dets eller de flankerende restriktionswebsteder forlades.

SNAREpins: minimalt udstyr til membranfusion

Rekombinante v- og t-SNARE proteiner rekonstitueret i separate lipid dobbeltlags vesikler samles i SNAREpins-SNARE komplekser, der forbinder to membraner.
Dette resulterer i spontan fusion af de dockede membraner ved fysiologisk temperatur. Dokkede, ikke-kondenserede mellemprodukter kan ophobes ved faldende temperaturer og kan smelte sammen, når de leveres til fysiologisk temperatur.

En levering af ikke-samlede v- og t-SNARE’er er påkrævet for at disse mellemprodukter kan skrive, men ikke for den fusion, der følger. Disse oplysninger indikerer, at SNAREpins er det minimale udstyr til mobil membranfusion.

 

Molekylær karakterisering af mitokondrie-apoptose-inducerende problem

Mitokondrier spiller en nøglehalvdel inden for reguleringen af ​​apoptose (celledøning). Deres intermembranhus rummer et antal proteiner, der kan frigøres via den ydre membran for at deltage i nedbrydningsdelen af ​​apoptose. Lige her rapporterer vi identifikation og kloning af et apoptose-inducerende problem, AIF, hvilket er nok til at inducere apoptose af fjernede kerner.

AIF er et flavoprotein med relativ molekylvægt 57.000, som deler homologi med de bakterielle oxidoreduktaser; det er normalt begrænset til mitokondrier, men translokeres til kernen, når apoptose induceres. Rekombinant AIF forårsager kromatinkondensation i fjerntliggende kerner og fragmentering af DNA i stor skala. Det inducerer oprenset mitokondrier til at lancere de apoptogene proteiner cytochrom c og caspase-9.

Mikroinjektion af AIF i cytoplasmaet af intakte celler inducerer kondensation af kromatin, spredning af mitokondrie-transmembranpotentialet og publicitet af phosphatidylserin i plasmamembranen. Ingen af ​​disse resultater forhindres af den omfattende caspaseinhibitor, ofte kendt som Z-VAD.fmk.

Overekspression af Bcl-2, som styrer åbningen af ​​mitochondriale permeabilitetsovergangsporer, forhindrer udledning af AIF fra mitokondrionen har dog ingen indflydelse på dens apoptogene øvelse. Disse resultater påpeger, at AIF er en mitokondrie-effektor af apoptotisk celledød.

 

Sikkerhed og effektivitet af genskift til Lebers medfødte amaurose

Lebers medfødte amaurose (LCA) er en gaggle af arvelige blændende lidelser med debut i hele barndommen. En type sygdom, LCA2, kan tilskrives mutationer i det retinale pigmentepitel-specifikke 65-kDa-proteingen (RPE65). Vi undersøgte beskyttelsen af ​​subretinal forsyning af et rekombinant adeno-associeret virus (AAV), der bærer RPE65 komplementært DNA (cDNA) (mængde ClinicalTrials.gov, NCT00516477 [ClinicalTrials.gov]).

Tre syge med LCA2 havde en passende native og systemisk bivirkningsprofil efter levering af AAV2.hRPE65v2. Hver berørt person havde en beskeden fortryllelse i målinger af nethinden udfører på subjektive vurderinger af synlig skarphed. Hos en enkelt berørt person udviklede sig et asymptomatisk makula-hul, og selv om prævalensen blev anset for at være en modsat begivenhed, havde den berørte person en vis tilbagevenden af ​​nethinden. Selvom opfølgningen var meget kort, og regelmæssig fantasifuld og forudgående ikke blev opnået, giver denne undersøgelse forudsætningen for yderligere genundersøgelsesforskning hos patienter med LCA.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *